Kaj je »hook efekt« in kako lahko vpliva na rezultat vašega testa za alergene?
V živilski industriji je opazen trend ponudbe izdelkov brez alergenih sestavin, prav tako se zmanjšuje uporaba preventivnega označevanja („lahko vsebuje“). Zaradi povečanja števila alergij na hrano in vse bolj zahtevnih predpisov je nadzor nenamerne prisotnosti alergenov v živilih zahteva tako potrošnikov kot standardov za varnost in kakovost hrane.
Špansko biotehnološko podjetje ZEULAB je specializirano za razvoj analitičnih rešitev za zagotavljanje nadzora varnosti hrane in vode. Njihovi izdelki so zasnovani tako, da uporabnikom omogočajo preprosto in hitro izvajanje testiranj.
Na področju imunokemijskih testiranj, kamor sodijo tudi testi za alergene, nas ZEULAB opozarja na pojav t.i. hook efekta (znan tudi kot prozonski efekt). Gre za situacijo, ko je koncentracija alergena v vzorcu tako visoka, da testna naprava prisotnosti alergena ne zazna pravilno, kar lahko vodi do lažno negativnih rezultatov.
Pri imunokemijskih testih, zlasti pri analizah antigen–protitelo (Ag–Ac), lahko pride do paradoksalnega pojava, ko je koncentracija antigena v vzorcu zelo visoka in to povzroči zasičenje vseh veznih mest tako zajemnega kot detekcijskega protitelesa. Posledično ne pride do ustrezne tvorbe kompleksa in test lahko pokaže napačen oz. lažno negativen rezultat.
Slika 1: Prikaz imunokromatografskega testa – sestavni deli in možni rezultati: pravilen pozitiven rezultat (B) in lažno negativen rezultat zaradi hook efekta (C)
Kdaj se pojavi hook efekt?
Hook efekt se lahko pojavi, kadar:
- uporabnik testira pozitivno kontrolo z zelo visoko vsebnostjo alergena,
- uporabnik testira živilo, ki vsebuje alergen kot sestavino (npr. oreščki v čokoladi),
- koncentracija alergena preseže sposobnost testa, da zazna pravilen rezultat.
V takih primerih lahko pride do zasičenja testnih linij, kar prepreči pravilno delovanje testa.
Zakaj je to pomembno pri testiranju alergenov?
Testi za alergene morajo biti zelo občutljivi, saj so alergeni pogosto prisotni v sledovih zaradi navzkrižne kontaminacije. Testi se zato izvajajo s serijskimi redčenji vzorcev, da se zagotovi meritev znotraj delovnega območja naprave. Če je koncentracija previsoka, test ne more pravilno izmeriti prisotnosti alergena, kar lahko vodi do napačno nizkega rezultata in s tem do napačnih nadaljnjih ukrepov.
Slika 2: Odnos med koncentracijo alergena in signalom testa. Pri zelo visokih koncentracijah alergena signal upade in ta pojav se imenuje hook efekt
Priporočilo za preprečevanje hook efekta
Ob testiranju vzorcev z domnevno visoko vsebnostjo alergena je ključnega pomena redčenje vzorca pred izvedbo testa. Tako se zmanjša koncentracija alergena in pri testiranju pridobimo bolj zanesljiv rezultat.